Фильтр

Серологический мониторинг в птицеводстве, интерпретация результатов иммуноферментного Анализа тест-системы ELISA компании БиоЧек

02.2020 / / Седов С.А.

Серологический мониторинг в птицеводстве, интерпретация результатов иммуноферментного Анализа тест-системы ELISA компании БиоЧек


Седов С.А., Ведущий ветеринарный врач-консультант Департамента птицеводства ГК ВИК

Современное развитие птицеводства, должно базироваться на комплексе диагностических профилактических мероприятий. Среди наиболее перспективных методов диагностики — иммуноферментный анализ (ИФА).
Тест-система ELISA компании БиоЧек — это чувствительный и простой в постановке метод определения уровня антител к различным заболеваниям птиц вирусной и бактериальной этиологии. Широкое применение метода ИФА подтверждает его практическую ценность при проведении мониторинга и оценки иммунного ответа после применения вакцин.
Точность и достоверность проведения иммуноферментного анализа диагностической тест-системой БиоЧек, определяется по трем критериям: положительный, отрицательный и референсный контроль. Только на основании достоверных результатов проводится правильная интерпретация. Интерпретация значений титров антител в сыворотке крови птицы после контакта с инфекционным агентом или интерпретация результатов вакцинации проводится путем оценки трех основных компонентов гуморального ответа: величине среднего титра, % коэффициента вариабельности (% КВ) и индекс вакцинации (ИВ). 
С помощью среднего титра проверяемого стада мы сможем определить, насколько эффективно реакция антител этих птиц после вакцинации. Фактически это даст нам возможность определить иммунный статус вашего стада. Оценка иммунного ответа в ИФА включает в себя необходимость сравнивать полученные значения средних титров с ожидаемыми поствакцинальными титрами (табл. 1).

Эти рекомендации основаны на нашем опыте и информации, полученной от наших клиентов. БиоЧек не несет никакой ответственности за результаты использования эти рекомендаций.  *REO, ORT, CAV, FAV-1: средние титры не вакцинированной птицы, наличие их в сочетании с клиническими признаками и патологоанатомическими изменениями — подозрение на инфекцию.

Значения титров могут колебаться в зависимости от кросса и возраста птицы, типа вакцины, программы вакцинации и других факторов. Ожидаемые поствакцинальные средние титры ремонтного молодняка отличаются от цыплят-бройлеров (табл. 2). Значения титров, указанные в таблице, базируются на двукратной живой вакцинации и однократной инактивированной вакцине в 16–18 недель.

Эти рекомендации основаны на нашем опыте и информации, полученной от наших клиентов. БиоЧек не несет никакой ответственности за результаты использования этих рекомендаций.
*ORT: титры >10 000 часто коррелируют с клиникой заболевания

Например, если показатели титров намного выше среднего ожидаемого титра, то можно предположить, что в стаде распространяется инфекция. Если показатели титров оказались ниже ожидаемых, то можно предположить, что методика вакцинации или техника вакцинации выполнена неправильно или вакцина низкого качества.
Другой параметр — однородность ответа, выраженный в %КВ (% коэффициента вариации), показывает, насколько варьируют показатели среднего титра в стаде. Чем ниже %КВ, тем более равномерное распределение титров и успешнее, качественнее прошла вакцинация. Чем выше %КВ, тем менее однородные титры, при этом поголовье не отреагировало на применение вакцины, это может быть связанно с тем, что вакцина просто не работает или неправильно выбран метод вакцинации, а так же нарушена техника вакцинации. Значение %КВ должно находиться в пределах требуемого диапазона. В качестве общего руководства в таблице 3 приведены, оптимальные значения %КВ после вакцинации.

Для большинства заболеваний %КВ после правильного применения инактивированной вакцины должен быть ниже 40%. Для живых вакцин значение %КВ должно быть ниже 60%. В таблице 3 указаны общие рекомендации, применимые для большинства живых и инактивированных вакцин. Следует иметь в виду, что использование живых вакцин против респираторных заболеваний, например, инфекционного бронхита кур, а так же ньюкаслской болезни в основном вызывает более разнородный иммунный ответ. Горизонтальное распространение вакцинного вируса среди стад может быть ограниченным, а кроме этого, живые ИБК-, НБ-вакцины могут также давать местный клеточный иммунитет, который нельзя измерить с помощью метода ELISA. В случае применения живых вакцин, например Пулвак IB Н120, ожидаемый %КВ для хорошей вакцинации будет составлять 40–60%. Значение %КВ на уровне <20% после вакцинации с классическим штаммом «Н120» следует рассматривать как подозрение на инфекцию. Однако при использовании в программе вакцинации более иммуногенных вакцин, например Пулвак IB Праймер, который содержит как классический штамм «Н120» серотипа Массачусетс, так и штамм «D274» Голландской группы, значения %КВ ниже 40% не являются редким. В случае применения живых вакцин против болезни Гамборо (Пулвак Бурса Ф или Бурсин плюс) характерен более однородный иммунный ответ, %КВ составляет менее 40%. Вакцинный вирус в Пулвак Бурса Ф и Бурсин плюс эффективно распространяется в стаде, обеспечивает иммунизацию даже тех птиц, которые были пропущены при выпаивании вакцины с питьевой водой.
Успех вакцинации также зависит от стойкости иммунного ответа, на что указывает средний титр, в зависимости от времени, то есть достаточно ли долго сохраняются титры во времени, необходима ли еще одна вакцинация с целью увеличения подъема титров выше минимальных защитных уровней или для добавления местного клеточного иммунитета. Так, при вакцинации ремонтного молодняка, где перед инактивированной вакциной первично применяются живые вакцины, полная сероконверсия (100% птиц позитивны) является более важным критерием успеха, чем только один показатель %КВ. Хорошее праймирование живыми вакцинами перед инактиватом оказывает сильное и благоприятное влияние на величину и стойкость титров в течение всего периода продуктивности. Убедитесь, что тесты всех птиц 100% серопозитивны.
При вакцинации поголовья против некоторых заболеваний, таких как инфекционный энцефаломиелит птиц или инфекционная анемия птиц, % сероконверсии является единственным показателем успешно проведенной вакцинации. Например, для ИАЦ, если более 60% исследуемых образцов серопозитивны, нет необ ходимости повторно применять вакцину.
Индекс вакцинации (ИВ) — новый параметр для оценки поствакцинального ответа, это отношение среднего  титра к % КВ: ИВ =  «Средний титр»/«% КВ». Значение ИВ ясно показывает разницу между успешно проведенной вакцинацией и плохой обработкой. Чем больше значение индекса вакцинации (соответственно высокое значение Среднего титра при низком значении % КВ), тем лучше проведена вакцина. Чем меньше значение индекса вакцинации (соответственно низкое значение среднего титра при высоком значении % КВ), тем хуже проведена вакцинация. Помимо этого, значение индекса вакцинации находится в определенных границах в зависимости от типа и кратности применяемой вакцины. Таким образом, ИВ может оказать помощь в вопросе дифференциации нормального иммунного ответа после применения вакцины или действия полевого возбудителя. Если ИВ превышает верхние границы, это может указывать на инфекцию (табл. 4).

В приведенной таблице 5 содержится примерная программа серологических исследований методом ИФА на различные заболевания в птицеводческих хозяйствах.

 

Для племенного бройлера 
1–10 D — Определение уровня материнских антител NDV, REO. Прогнозирование даты вакцинации против IBD. 
8–10 W — Контроль после проведенной вакцинации против IBD, NDV, IBV; при отрицательных и низких титрах повторное проведение вакцинации. Мониторинг REO. 
16–18 W — Контроль проведённой вакцинации живыми вакцинами против IBD, NDV, IBV перед применением инактивированных вакцин. Мониторинг заболевания REO. Серомониторинг перед вакцинацией птицы против энцефаломиелита (AE) в 16 недель и исследование через 4 недели после проведения вакцинации. 
22–24 W — Контроль проведённой вакцинации инактивированной вакциной против IBD, NDV, IBV (6 недель после вакцинации). Мониторинг заболевания REO. 
35–38 W — Контроль проведённых вакцинаций против IBD, NDV, IBV, REO в середине продуктивного периода у птицы.
55–60 W — Контроль проведённых вакцинаций против IBD, NDV, IBV, REO в конце продуктивного периода у птицы. Оптимальный серомониторинг MG/MS — каждые 6 недель, для невакцинированных стад не должно быть положительных титров. Исследование на ART, Se/St, CAV — по необходимости в зависимости от эпизоотической ситуации на птицефабрике.

Для коммерческой несушки 
1–10 D — Определение уровня материнских антител NDV, REO. Прогнозирование даты вакцинации против IBD. Мониторинг заболевания Se/St. 
8–10 W — Контроль после проведенной вакцинации против IBD, NDV, IBV; при отрицательных и низких титрах повторное проведение вакцинации NDV, IBV. Мониторинг REO, Se/St. 
14–16 W — Контроль проведённой вакцинации живыми вакцинами против NDV, IBV перед применением инактивированных вакцин. Мониторинг заболевания Se/St, REO. Исследование птицы перед применением вакцины в 16-недельном возрасте против энцефаломиелита (AE) и исследование через 4 недели после проведения вакцинации. 
22–24W — Контроль проведённой вакцинации инактивированной вакциной против NDV, IBV, EDS (6 недель после вакцинации). Мониторинг заболевания Se/St, REO. 
35–38 W — Контроль проведённых вакцинаций NDV, IBV в середине продуктивного периода у птицы. Мониторинг заболевания Se/St. 
55–60 W — Контроль проведённых вакцинаций NDV, IBV в конце продуктивного периода у птицы. Мониторинг заболевания Se/St Оптимальный серомониторинг MG/MS — каждые 6 недель, для невакцинированных стад не должно быть положительных титров. Исследование на ART — по необходимости в зависимости от эпизоотической ситуации на птицефабрике.

Для товарного поголовья бройлеров 
1–6 D — мониторинг уровня материнских антител NDV, REO. Расчёт даты вакцинации против IBD. Мониторинг заболевания MG/MS. 
45 D — мониторинг эффективности проведенных ранее вакцинаций IBV, NDV, IBD. Исследование на ART, Se/ St, MG/MS, ORT, REO, AI — по необходимости в зависимости от эпизоотической ситуации на птицефабрике.
Иммуноферментный анализ с помощью тест-системы ELISA компании БиоЧек является одним из перспективных серологических методов, который позволяет проводить мониторинг основных инфекционных заболеваний на протяжении всего периода выращивания и определять, насколько правильно применена вакцина и какова её эффективность.    

Статья опубликована в журнале Аграрная наука №2 (февраль) 2020г.

 

Наверх