Фильтр

Серологический мониторинг в птицеводстве, интерпретация результатов иммуноферментного Анализа тест-системы ELISA компании БиоЧек

02.2020 / / Седов С.А.

Серологический мониторинг в птицеводстве, интерпретация результатов иммуноферментного Анализа тест-системы ELISA компании БиоЧек


Седов С.А., Ведущий ветеринарный врач-консультант Департамента птицеводства ГК ВИК, e-mail: sedov@vicgroup.ru

Черников А.А., Технический специалист по работе с клиентами в Восточной Европе, компания БиоЧек, e-mail: alex@biochek.com

Дорофеева С.Г., Заместитель генерального директора по ветеринарии ГК ВИК, к.в.н., e-mail: dorofeeva@vicgroup.ru


Ключевые слова: иммуноферментный анализ, цыплята-бройлеры, несушка, живые вакцины, инактивированные вакцины, иммунокомплексные вакцины, средний титр антител, коэффициент вариации, индекс вакцинации, программа серологических исследований.

Резюме: Метод иммуноферментного анализа занимает ведущее место при мониторинге инфекционных болезней птиц. Тест-система ELISA компании БиоЧек – это чувствительный, высокоспецифичный и поддающийся автоматизации метод оценки иммунного статуса птиц. Оценка иммунного ответа в ИФА включает в себя необходимость сравнивать полученные значения средних титров с ожидаемыми поствакцинальными титрами. В работе представлена программа серологических исследований на различные заболевания в птицеводческих хозяйствах.

 

 

Современное развитие птицеводства, должно базироваться на комплексе диагностических профилактических мероприятий. Ведущий метод в диагностике – иммуноферментный анализ (ИФА). 
Тест-система для ИФА (ELISA) компании БиоЧек – это чувствительный и простой в постановке метод определения уровня антител к различным заболеваниям птиц вирусной и бактериальной этиологии. 
Широкое применение метода ИФА подтверждает его практическую ценность при проведении мониторинга и оценки иммунного ответа после применения вакцин.
Точность и достоверность проведения иммуноферментного анализа диагностической тест-системой БиоЧек, определяется по трём критериям: положительный, отрицательный и референсный контроль.
Только на основании достоверных результатов проводится правильная интерпретация. Интерпретация значений титров антител в сыворотке крови птицы после контакта с инфекционным агентом или интерпретация результатов вакцинации проводится путем оценки трех основных компонентов гуморального ответа: величине среднего титра, % коэффициента вариабельности (% КВ) и индекс вакцинации (ИВ).
С помощью среднего титра проверяемого стада мы сможем определить насколько эффективно реакция антител этих птиц после вакцинации. Фактически это даст нам возможность определить иммунный статус вашего стада. Оценка иммунного ответа в ИФА включает в себя необходимость сравнивать полученные значения средних титров с ожидаемыми поствакцинальными титрами (Таблица №1).

Эти рекомендации основаны на нашем опыте и информации, полученной от наших клиентов. БиоЧек не несет никакой ответственности за результаты, используя эти рекомендации.
*При нарушении техники вакцинации, хранении и транспортировки вакцины, неправильно выбранная дата вакцинации, плохое качество воды и т.д. 
**REO, ORT, CAV, FAV-1: средние титры не вакцинированной птицы, наличие их в сочетании с клиническими признаками и патологоанатомическими изменениями подозреваются на инфекцию. 

Значения титров могут колебаться в зависимости от кросса и возраста птицы, типа вакцины, программы вакцинации и других факторов. Ожидаемые поствакцинальные средние титры ремонтного молодняка отличаются от цыплят-бройлеров (Таблица №2). Значения титров указанные в таблице базируются на двукратной живой вакцинации и однократная инактивированная вакцина в 16-18 недель.

Эти рекомендации основаны на нашем опыте и информации, полученной от наших клиентов. БиоЧек не несет никакой ответственности за результаты, используя эти рекомендации.
*При нарушении техники вакцинации, хранении и транспортировки вакцины, неправильно выбранная дата вакцинации, плохое качество воды и т.д.
**ORT: титры >10 000 часто коррелируют с клиникой заболевания

 

Например, если показатели титров намного выше среднего ожидаемого титра, то можно предположить, что в стаде распространяется инфекция. Если показатели титров оказались ниже ожидаемых, то можно предположить, что методика вакцинации или техника вакцинации выполнена неправильно или вакцина низкого качества.

Другой параметр - однородность ответа, выраженный в %КВ (% коэффициент вариации), показывает насколько варьируют показатели среднего титра в стаде. Чем ниже %КВ, тем более равномерное распределение титров и успешнее, качественнее прошла вакцинация. Чем выше %КВ, тем менее однородные титры, при этом поголовье не отреагировало на применение вакцины, это может быть связанно с тем, что вакцина просто не работает или неправильно выбран метод вакцинации, а так же нарушена техника вакцинации. Значение %КВ должно находиться в пределах требуемого диапазона. В качестве общего руководства в (Таблице №3) приведены, оптимальные значения %КВ после вакцинации.

 

Для большинства заболеваний, %КВ после правильного применения инактивированной вакцины должен быть ниже 40%. Для живых вакцин значение %КВ, должен быть ниже 60%. В таблице №3 указаны общие рекомендации применимые для большинства живых и инактивированных вакцин. Следует иметь в виду, что использование живых вакцин против респираторных заболеваний, например, инфекционный бронхит кур, а так же ньюкаслской болезни в основном вызывает более разнородный иммунный ответ. Горизонтальное распространение вакцинного вируса среди стад может быть ограниченным, а, кроме этого, живые ИБК, НБ вакцины могут также давать местный клеточный иммунитет, который нельзя измерить с помощью метода ELISA. В случае применения живых вакцин, например штамм Н120, ожидаемый %КВ для хорошей вакцинации будет составлять 40-60%. Значение %КВ на уровне <20%, после вакцинации с классическим штаммом Н120 следует рассматривать, как подозрение на инфекцию. Однако, при использовании в программе вакцинации более иммуногеной вакцины, которая содержит как классический штамм Н120 серотипа Массачусетс так и штамм D274 Голландской группы, значения %КВ ниже 40% не являются редким. В случае применения живых вакцин против болезни Гамборо, характерен более однородный иммунный ответ, %КВ составляет менее 40%.
Успех вакцинации так же зависит от стойкости иммунного ответа, на что указывает средний титр, в зависимости от времени, то есть, достаточно ли долго сохраняются титры во времени, необходима ли еще одна вакцинация с целью увеличения подъема титров выше минимальных защитных уровней или для добавления местного клеточного иммунитета. Так при вакцинации ремонтного молодняка, где перед инактивированной вакциной, первично применяются живые вакцины, полная сероконверсия (100% птиц позитивны) является более важным критерием успеха, чем только один показатель %КВ. Хорошее праймирование живыми вакцинами, перед инактиватом, оказывает сильное и благоприятное влияние на величину и стойкость титров в течение всего периода продуктивности. Убедитесь, что тесты всех птиц 100% серопозитивны.
При вакцинации поголовья против некоторых заболеваний, таких как инфекционный энцефаломиелит птиц или инфекционная анемия птиц, % сероконверсии является единственным показателем успешно проведенной вакцинации. Например, для ИАЦ, если более 60% исследуемых образцов серопозитивны, то нет необходимости повторно применять вакцину.
Индекс вакцинации (ИВ) – новый параметр для оценки поствакцинального ответа, это отношение Среднего  титра к % КВ: ИВ =  "Средний титр" /"% КВ" 
Значение (ИВ) ясно показывает разницу между успешно проведенной вакцинацией и плохой обработкой. Чем больше значение Индекса вакцинации (соответственно высокое значение Среднего титра при низком значении % КВ), тем лучше проведена вакцина. Чем меньше значение Индекса вакцинации (соответственно низкое значение Среднего титра при высоком значении % КВ), тем хуже проведена вакцинация. Помимо этого, значение Индекса Вакцинации (ИВ) находится в определенных границах, в зависимости от типа и кратности применяемой вакцины. Таким образом, (ИВ) может оказать помощь в вопросе дифференциации нормального иммунного ответа после применения вакцины или действия полевого возбудителя. Если (ИВ) превышает верхние границы, это может указывать на инфекцию (Таблица №4).

В приведенной таблице 5 содержится примерная программа серологических исследований методом ИФА на различные заболевания в птицеводческих хозяйствах.

 

Для племенного бройлера 
1–10 D — Определение уровня материнских антител NDV, REO. Прогнозирование даты вакцинации против IBD. 
8–10 W — Контроль после проведенной вакцинации против IBD, NDV, IBV; при отрицательных и низких титрах повторное проведение вакцинации. Мониторинг REO. 
16–18 W — Контроль проведённой вакцинации живыми вакцинами против IBD, NDV, IBV перед применением инактивированных вакцин. Мониторинг заболевания REO. Серомониторинг перед вакцинацией птицы против энцефаломиелита (AE) в 16 недель и исследование через 4 недели после проведения вакцинации. 
22–24 W — Контроль проведённой вакцинации инактивированной вакциной против IBD, NDV, IBV (6 недель после вакцинации). Мониторинг заболевания REO. 
35–38 W — Контроль проведённых вакцинаций против IBD, NDV, IBV, REO в середине продуктивного периода у птицы.
55–60 W — Контроль проведённых вакцинаций против IBD, NDV, IBV, REO в конце продуктивного периода у птицы. Оптимальный серомониторинг MG/MS — каждые 6 недель, для невакцинированных стад не должно быть положительных титров. Исследование на ART, Se/St, CAV — по необходимости в зависимости от эпизоотической ситуации на птицефабрике.

Для коммерческой несушки 
1–10 D — Определение уровня материнских антител NDV, REO. Прогнозирование даты вакцинации против IBD. Мониторинг заболевания Se/St. 
8–10 W — Контроль после проведенной вакцинации против IBD, NDV, IBV; при отрицательных и низких титрах повторное проведение вакцинации NDV, IBV. Мониторинг REO, Se/St. 
14–16 W — Контроль проведённой вакцинации живыми вакцинами против NDV, IBV перед применением инактивированных вакцин. Мониторинг заболевания Se/St, REO. Исследование птицы перед применением вакцины в 16-недельном возрасте против энцефаломиелита (AE) и исследование через 4 недели после проведения вакцинации. 
22–24W — Контроль проведённой вакцинации инактивированной вакциной против NDV, IBV, EDS (6 недель после вакцинации). Мониторинг заболевания Se/St, REO. 
35–38 W — Контроль проведённых вакцинаций NDV, IBV в середине продуктивного периода у птицы. Мониторинг заболевания Se/St. 
55–60 W — Контроль проведённых вакцинаций NDV, IBV в конце продуктивного периода у птицы. Мониторинг заболевания Se/St Оптимальный серомониторинг MG/MS — каждые 6 недель, для невакцинированных стад не должно быть положительных титров. Исследование на ART — по необходимости в зависимости от эпизоотической ситуации на птицефабрике.

Для товарного поголовья бройлеров 
1–6 D — мониторинг уровня материнских антител NDV, REO. Расчёт даты вакцинации против IBD. Мониторинг заболевания MG/MS. 
45 D — мониторинг эффективности проведенных ранее вакцинаций IBV, NDV, IBD. Исследование на ART, Se/ St, MG/MS, ORT, REO, AI — по необходимости в зависимости от эпизоотической ситуации на птицефабрике.

Выводы
Тест-система для ИФА (ELISA) компании БиоЧек является одним из перспективных серологических методов, который позволяет проводить мониторинг основных инфекционных заболеваний на протяжении всего периода выращивания и определять, насколько правильно применена вакцина и её эффективность.  

Статья опубликована в журнале Аграрная наука №2 (февраль) 2020г.

 

Наверх