Дураков В.А.
Введение
В связи с перепроизводством свинины на внутреннем рынке РФ особое значение приобретает сохранение рентабельности производства и недопущение роста затрат при выращивании свиней, в т.ч. связанных с инфекционными заболеваниями. Эпизоотическое благополучие предприятия достигается благодаря комплексу мер по биобезопасности, которые могут быть разделены на внешнюю (направленную на защиту стада от проникновения инфекционных агентов извне) и внутреннюю биобезопасность (направленную на контроль уже имеющихся на предприятии инфекций) [1].
Неотъемлемой частью внешней биобезопасности является проведение диагностических исследований ввозимого поголовья в соответствии с Перечнем противоэпизоотических мероприятий. При этом чаще всего проводятся исследования сыворотки крови методом иммуноферментного анализа (ИФА), основанного на выявлении антител (АТ) к антигенам вирулентных для свиней бактерий и вирусов. К сожалению, в ходе планирования данных исследований не всегда учитываются важные особенности инфекционного процесса: различия в динамике выработки антител (сероконверсии) при различных инфекционных патологиях, динамика и уровень распространения заболевания в группе — в результате остается угроза необнаружения инфицированных животных и животных-носителей. Например, ранее было установлено, что АТ к M. hyopneumoniae могут быть обнаружены в сыворотке крови спустя только 6 недель после инфицирования [3], что делает практически невозможным обнаружение недавно инфицированных животных при помощи серологических методов. Также существуют затруднения при определении носительства возбудителя A. pleuropneumoniae или субклинической формы актинобациллезной плевропневмонии (АПП), так как концентрации АТ часто недостаточно для обнаружения [3].
В связи с ограниченными возможностями серологических исследований становится целесообразным использование дополнительно молекулярной диагностики (ПЦР). При этом важно при отборе проб учитывать тропизм инфекционных агентов при субклинической форме заболевания. В отношении M. hyopneumoniae предпочтительным материалом для ПЦР-исследований являются смывы со слизистой оболочки крупных бронхов и трахеи [5], что позволяет обнаруживать до 52% инфицированных животных независимо от того, сколько времени прошло от момента инфицирования [8].
Прижизненно для этого выполняется бронхоальвеолярный лаваж, который представляет собой трудоемкую и инвазивную процедуру [6], что может затруднять ее применение в рамках регулярных исследований при поставках ремонтного поголовья. Как альтернатива может быть рассмотрен отбор проб от животных, выращенных на том же предприятии и направленных на убой. Данный подход позволяет избежать трудоемких манипуляций,предоставляет возможность визуального осмотра внутренних органов, снижает вероятность контаминации образцов и обеспечивает требуемый размер выборки (для M. hyopneumoniae — не менее 30 проб). Исследования субклинической формы АПП показали, что при данной форме заболевания предпочтительным материалом для молекулярной диагностики являются смывы с крипт миндалин (для прижизненной диагностики) или фрагменты миндалин (для послеубойной диагностики) [4], отбор которых также возможен на убойном пункте от выбракованных животных племенной фермы. Использование метода ПЦР для обнаружения ДНК A. pleuropneumoniae в тканях миндалин позволяет обнаруживать 98% инфицированных животных независимо от того, было ли ранее клиническое проявление АПП или имеет место бессимптомная колонизация верхних отделов дыхательных путей. В то время как наборы-ИФА для выявления АТ к ApxIV показывают чувствительность в 94% только у переболевших животных и не обладают достаточной чувствительностью для выявления клинически здоровых особей с колонизацией верхних дыхательных путей [7].
Применение лабораторной диагностики в рамках внутренней биобезопасности основано на регулярных мониторинговых исследованиях, например, в отношении цирковирусной инфекции свиней (ЦВИС). В настоящее время субклиническая форма ЦВИС остается наиболее распространенной в промышленном свиноводстве, что обуславливает не только экономический ущерб, но и иммуносупрессию от данного заболевания.
Системный принцип мониторинговых исследований при ЦВИС основан на применении ИФА и количественной ПЦР в реальном времени: при этом первым проводится исследование сыворотки крови от животных разных групп методом ИФА для построения серологического профиля предприятия. Вторым этапом мониторинговых исследований будет определение количества копий ДНК ЦВС2 в сыворотке крови (при субклинической форме заболевания обнаруживается 105–106 копий ДНК ЦВС2 в 1 мл сыворотки крови, а при клинической форме — более 107 копий ДНК ЦВС2 в 1 мл сыворотки крови) [11].
Выводы
Анализ существующих методов лабораторной диагностики ряда инфекционных заболеваний свиней выявил недостатки применения только серологических методов исследований при карантинировании животных. Дополнительное использование метода ПЦР в реальном времени позволяет минимизировать риск заноса инфекций на предприятие. Системные мониторинговые исследования предоставляют дополнительную информацию об инфицировании поголовья внутри предприятия со стороны имеющихся инфекционных агентов и развитии субклинических форм заболеваний.