Бабанин И.В., Голубчикова О.А., Дорофеева С.Г.
Журнал "Ценовик"; 06.2023
Г. Бабин, ветеринарный врач консультант департамента птицеводства,
О. Голубчикова, ветеринарный врач-консультант департамента птицеводства,
С. Дорофеева, зам. генерального директора по ветеринарии, канд. вет. наук, ГК ВИК
Инфекционная бурсальная болезнь птиц (ИББ, болезнь Гамборо, инфекционный бурсит кур), представляет собой высококонтагиозную вирусную инфекцию. Инфекционная бурсальная болезнь среди птицепоголовья возникает внезапно, уровень заболеваемости достигает 100%, а смертность в среднем 20–30%. Экономический ущерб от этой болезни значителен.
Ветеринарным врачам необходимо подтвердить клинические признаки болезни лабораторными исследованиями, для этого используется метод иммуноферментного анализа (ИФА). На сегодняшний день лидером в области ИФА диагностики птиц является компания BioChek. Метод ИФА (ELISA) тест-системы BioChek является наиболее чувствительным методом, превосходящим остальные. Они позволяют не только достоверно мониторить, но и оценивать уровень материнских антител (МА) с целью точного расчета дня входа с вакцинацией против ИББ.
Известно, что куры являются единственными представителями животного мира, у которых развивается клиническая форма болезни с характерными патологоанатомическими изменениями органов при воздействии вируса ИББ. Необходимо отметить, что в отношении кур полевые вирусы проявляют различную степень патогенности. Вакцины против болезни Гамборо имеют различную инвазивность для кур.
Для подтверждения диагноза на ИББ необходимо провести дифференциальную диагностику и в первую очередь необходимо исключить инфекционный бронхит, отравление сульфаниламидами, микотоксикозы, а также болезнь Ньюкасла, нефроз-нефрит, лимфоидный лейкоз, болезнь Марека, жировые токсикозы.
В статье представлена информация по мониторингу и контролю ИББ на птицефабрике Центрального региона РФ, площадки БП-16 по трём цехам: 54, 57, 62 с использованием тест-системы BioChek.
Общепризнано, что метод ИФА является наиболее чувствительным и универсальным, значительно превосходящим другие иммунологические реакции. Принцип ИФА основан на визуализации иммунных комплексов за счет использования конъюгированных с ферментом антител. Хромогенный эффект с высокой степенью точности фиксируют средствами спектрофотомерии.
Все существующие отечественные и импортные коммерческие иммуноферментные тест-системы представляют собой твердофазный вариант (ИФА, ELISA). Принцип метода заключается в образовании комплекса антитело–антиген при внесении вирусного антигена в лунки полистироловой планшеты с иммобилизированными антителами. После внесения исследуемой сыворотки, в которой присутствуют специфические антитела, блокируются свободные антигенные детерминанты образовавшегося иммунного комплекса и антивирусный конъюгат не вступает в реакцию с антигеном.
Для специфической профилактики ИББ применяют вакцины, которые по антигенной активности можно разделить на 5 видов:
1. Мягкие — из аттенуированного вируса, не вызывающие существенных изменений в бурсе. Эффективны у цыплят, не имеющих материнских антител. Применяются такие вакцины и при снижении патогенности полевого вируса, когда болезнь протекает бессимптомно. Используются редко.
2. Вакцины промежуточного типа из вируса умеренной вирулентности. Эффективны в условиях острой вспышки инфекции и в стационарно неблагополучных хозяйствах, так как такие вакцины способны формировать иммунитет у цыплят с материнскими антителами и создавать нужную защиту в более ранние сроки.
3. Вакцины вирулентные из слабоаттенуированного вируса, вызывающего острые изменения в фабрициевой сумке. Это «горячие вакцины», которые вызывают клиническое переболевание птицы, но с меньшим отходом (до 2%). Они способны формировать иммунитет у цыплят, имеющих материнские антитела. Недостатком таких вакцин является их вы раженная остаточная вирулентность, способность вакцинных вирусов персистировать во внешней среде и вызывать иммуносупрессивное действие.
4. Инактивированные вакцины, обеспечивающие более напряженный иммунитет у цыплят, позволяющие защитить молодняк птицы от заболевания ИББ в ранний период их жизни.
5. Иммунокомплексные вакцины, которые поселяются в фолликулярных дендритных клетках (селе зенка) Эти клетки способны связывать и сохранить иммунокомплексы, так что они уклоняются от иммунной системы. По мере снижения уровня материнских антител вирус диссоциируется от антитела и доходит в бурсу. Антитела связаны с вакцинным вирусом ковалентными связями.
Вакцинный штамм реплицируется в каждом цыпленке, когда птица готова принять вирус. Иммунокомплекс безопасен в инкубаторе и in ovo.
Антитела, переданные от матери через желток яйца, могут защитить птенцов против раннего инфицирования вирусом ИББ.
При этом обеспечивается защита от иммуносупресивного эффекта вируса. Полупериод существования материнских антител против вируса ИББ составляет от трех до пяти дней.
Следовательно, если известны титры антител потомства, можно предсказать время появления чувствительности у цыплят к вирусу болезни Гамборо. B. Lucio и S.B. Hitchner доказали, что после падения титров антител ниже 1 : 100 цыплята стали абсолютно чувствительными к инфекции. В то же время титры от 1 : 100 до 1 : 600 дают приблизительно 40% защиты от заражения. J.K. Skeeles отмечал, что титры должны упасть ниже 1 : 64, прежде чем станет возможна эффективная вакцинация цыплят ослабленным штаммом вируса ИББ.
Такие титры также называют целевыми, их учитывают при входе с вакцинацией против ИББ. Изобщемировой практики BioChek эти титры имеют следующие значения:
• оптимальный титр вакцинации (горячие вакцины — 800–1000, промежуточные вакцины — 500–800; мягкие вакцины — 250–500);
• % охвата вакцинацией;
• период полураспада антител.
Прогнозируя дату вакцинации, необходимо учитывать преодолеваемой уровень материнских антител различных вакцин (табл. 1).
Исключение составляет иммунокомплексная вакцина Бурсаплекс производства Zoetis, или аналог — вакцина Трансмун производства Ceva, где титр материнских антител имеет меньшее значение и вакцинация проводится в инкубатории. Применение иммунокомплексной вакцины Бурсаплекс позволяет исключить расчет первой даты вакцинации, которая зависит от титров МА, тем самым избежать погрешности в качестве вакцинации птицы. Данный эффект заключается в принципиально ином механизме действия иммунокомплексных вакцин.
Количественные показатели и продолжительность выявления материнских антител у цыплят зависят как от возраста, в котором проводили вакцинацию родительских стад, так и от кратности, способа вакцинации и вида вакцины.
Период полураспада антител — время, за которое уровень антител в результатах их распада снижается в два раза. Продолжительность этого периода для каждого вида животного постоянная и имеет определенное для данного вида значение. Период полураспада антител различается в зависимости от кросса и возраста птицы. Доказано, что период полураспада МА к вирусу ИББ варьируется в следующих пределах, в зависимости от возраста (табл. 2).
Во многом период полураспада зависит от условий содержания, кормления и является величиной, отличительной для каждого стада.
Для установления оптимальных сроков иммунизации предложена математическая формула (формула Девентера), где, исходя из значений титра антител у суточных цыплят и периода их полураспада, рассчитывают сроки вакцинации против ИББ.
Bart van Leerdam отмечает, что важным моментом является то, что значения периода полураспада варьируются и зависят от возраста птицы на момент взятия пробы. Это существенно, поскольку правильный прогноз даты вакцинации также зависит от правильного использования значений периода полураспада, которые должны соответствовать возрасту отбора сыворотки крови.
Считается, что более высокие значения периода полураспада в течение первых двух дней жизни цыпленка являются результатом повышения титров МА из-за «эффекта желточного мешка». Резорбция желтка, содержащего МА, наиболее высока в течение первых трех дней жизни цыпленка, что приводит к повышению (или стабилизации), а не к их снижению титров.
Прогнозы даты вакцинации против ИББ, основанные на расчетных значениях периода полураспада, дали высокий уровень точности (около 97%), что дополнительно подтверждает рекомендации по значениям периода полураспада, указанные производителем тест-системы ИФА BioChek.
Кроме того, существует ряд обязательных условий, от выполнения, которых зависит успех проводимой вакцинации. В частности, образцы крови следует отбирать от клинически здоровой птицы, не менее 23 проб сыворотки крови с корпуса/цеха; отбор осуществляется методом конверта.
Прогнозы даты вакцинации на основании лабораторных исследований помогут ветеринарному специалисту применить живые вакцины в нужное время, чтобы обеспечить разумный «прием вакцины», без нейтрализующего эффекта МА.
Дополнительный мониторинг средних титров через три–пять недель после живой вакцинации против ИББ также полезен для определения того, была ли вакцинация (и прогнозирование) в конечном итоге успешной или нет. Если средние титры находятся в пределах ожидаемого диапазона после вакцинации, вакцинация и прогноз считаются успешными. Если результирующие титры антител ниже ожидаемых уровней и /или содержат высокий процент отрицательных результатов, это обычно указывает на слишком раннюю вакцинацию.
На гистограмме 1 показано, почему нельзя ориентироваться на уровень материнского иммунитета по 10 пробам сыворотки крови от птицы с одного цеха. В данном случае наблюдается высокий CV % из-за разброса титрогрупп, в результате чего нет понимания, какой процент поголовья имеет низкий титр антител и готов к вакцинации и у какого процента птицы уровень МА ещё не скоро достигнет уровня целевого «пробивного» титра вакцины. При такой малой выборке прогноз вакцинации недостоверен.
На гистограмме 1 показано, почему нельзя ориентироваться на уровень материнского иммунитета по 10 пробам сыворотки крови от птицы с одного цеха. В данном случае наблюдается высокий CV % из-за разброса титрогрупп, в результате чего нет понимания, какой процент поголовья имеет низкий титр антител и готов к вакцинации и у какого процента птицы уровень МА ещё не скоро достигнет уровня целевого «пробивного» титра вакцины. При такой малой выборке прогноз вакцинации недостоверен.
На гистограмме 2 коэффициент вариации титров в ожидаемых пределах (диапазон 30–50%), средний титр соответствует половине антител, полученных от матери (исходя из схемы вакцинации родительского стада). Исследуемая сыворотка получена от цыплят- бройлеров, комплектующихся из одного и того же родительского стада, при этом разница в возрасте родителей — до двух недель. В данном случае рекомендуется проводить мониторинг МА у цыплят в возрасте от 3 до 5 дней от каждого комплектующего родительского стада.
На гистограмме 3 разнообразный уровень МА, большой разброс титрогрупп, из-за чего высокий CV, %.
Данный бройлерный цех комплектовали от инкубационного яйца трёх разновозрастных собственных родительских стад и инкубационного яйца, поступившего из Турции. У цыплят с титрами от второй до четвёртой титрогрупп, при отдельном расчёте по формуле Девентера, уровень МА уже к десятому–одиннадцатому дню жизни будет ниже целевого титра промежуточной живой вакцины. Цыплята с титрами от седьмой по девятую титрогруппу будут готовы к вакцинации примерно к четырнадцатому– пятнадцатому дню. Из-за этого сложно рассчитать универсальную дату входа с вакцинацией для всего цеха. Для некоторых цыплят будет или слишком рано, или слишком поздно.
В этом случае рекомендуется применить иммунокомплексную вакцину на инкубаторе с целью выравнивания уровня материнских антител перед праймированием живой вакциной. Также рекомендуем раз в тур отбирать сыворотку крови птицы из произвольных цехов за один–два дня до планируемой второй вакцинации, с целью мониторинга распада материнских антител. Это позволит удостовериться, что уровень антител снизился у большего количества поголовья до целевого титра используемой вакцины.
На основании полученных гистограмм ветеринарный врач производит расчёт дня входа с вакцинацией против болезни Гамборо.
Рассмотрим варианты расчётов по результатам исследований сыворотки крови цыплят — бройлеров из цехов 54, 57, 62 площадки БП-16 предприятия Центрального региона.
Таблицы 3, 4, 5: Excel таблицы расчёта периода полураспада МА, полученных из гистограмм 1, 2, 3 с % стада, достигнувшим целевого титра антител, и расчётный срок вакцинации.
Цех 54 площадки БП-16 достигнет целевого титра 500 антител: на 13-й день жизни — 30% поголовья, на 14, 15, 16-й день жизни — 60% поголовья.
Данный расчёт является неинформативным из-за малой выборки исследуемого поголовья.
Цех 57 площадки БП-16 достигнет целевого титра 500 антител: на 12-й день жизни — 22,7% поголовья, на 14-й день жизни — 77,2% поголовья.
Цех 62 площадки БП-16 достигнет целевого титра 500 антител: на 12-й день жизни — 39,1% поголовья, на 14-й день жизни — 73,9% поголовья.
В зависимости от желаемого % покрытия ветеринарный врач выбирает день входа с вакцинацией против инфекционной болезни Гамборо.
Прогноз даты вакцинаций в программе BioChek рассчитывается по формуле Девентера:
ВВ = (Log 2 ИТ – Log 2 ЦТ) × ПП + В,
где ВВ — возраст вакцинации;
ИТ — исходный титр материнских антител; ЦТ — целевой титр материнских антител; ПП — период полураспада;
В — возраст птицы в момент взятия крови.
Отчёт «Прогноз даты вакцинации» для цыплят- бройлеров в возрасте четырёх–пяти дней из цехов 54, 57 и 62 площадки БП-16 птицефабрики Центрального региона (табл. 6)
Разрыв в днях между последующими вакцинациями может составлять удвоенный период полураспада (для бройлеров 3–6 дней, для родителей 4–9 дней, для несушки 5–12 дней).
По результатам отчёта «Прогноз даты вакцинации» в программе BioChek:
• птица цеха 54 площадки БП-16 достигнет целевого титра 500 антител: в возрасте 12 дней — 30% покрытия поголовья, в возрасте 16 дней — 70% покрытия поголовья;
• птица цеха 57 площадки БП-16 достигнет целевого титра 500 антител: в возрасте 12 дней — 30% покрытия поголовья, в возрасте 14 дней — 70% покрытия поголовья;
птица цеха 62 площадки БП-16 достигнет целевого титра 500 антител: в возрасте 12 дней — 30% покрытия поголовья, в возрасте 13 дней — 70% покрытия поголовья.
При планировании проведения двойной вакцинации цыплят-бройлеров против болезни Гамборо разрыв между вакцинациями составляет 3–6 дней.
Проведенное исследование показало, что при подсчете целевого титра МА наблюдается расхождение во времени первой вакцинации и % стада птицы с титром антител, готовых к успешной вакцинации. В этот период важной информацией является история вакцинации, возраст, однородность стада и комплектация родительских стад. Характерно, что собственный эпизоотический фон на каждом пред приятии также может определить результат вакцинации.
Одним из важных критериев достоверных результатов ИФА является правильный отбор проб сыворотки крови. Кратность исследования соответствует плану серомониторинга предприятия.
В ситуациях, когда титры слишком различаются, коэффициент вариации высокий, невозможно определить единую дату вакцинации для птицы всего корпуса. Наиболее эффективны иммунокомплексные вакцины, например Бурсаплекс.
Диагностика методом ИФА с помощью тест- систем BioChek при соблюдении вышеперечисленных правил и верной интерпретации позволяет весьма успешно и точно определить подобные отклонения для принятия решений при вхождении с вакцинацией против ИББ.
Серологический мониторинг циркуляции вируса ИББ в стаде при исследовании в тест-системе для ИФА (ELISA) компании BioChek — инструмент для снижения расходов и получения прибыли предприятием.
